酶标仪案例
当前位置:
首页 >>
酶标仪案例>使用酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺的操作方法
使用酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺的操作方法
作者:admin 时间:2021-05-19 01:47:18 点击次数:4649
酶联吸附法测定三聚氰胺残留量的方法。用提取液将样品中三聚氰胺均质振荡提取样品。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔开始反应。在30分钟的孵育过程中,样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争,与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后,微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后,在每孔中加入一种清晰的底物溶液,结合酶标仪将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应,根据各孔颜色深度读取数据。根据标准颜色,得到样品中三聚氰胺的浓度值。
一、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺所需的材料:
1、蒸馏水或去离子水
2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸头
3、4000转离心机
4、吸水纸或相当的吸水材料
5、450nm的酶标仪
6、计时器
7、20mM PBS:需自行配制
8、清洗液:需自行配制
二、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺试剂配制:
1、20mM PBS: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml
2、清 洗 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20
三、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺样品的前处理: 鸡蛋(稀释倍数:5)
1、称1g混合好的全蛋,加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs,震荡2min;
2、4000转离心5min;
3、取2ml 上清液加入2ml异辛烷:氯仿(2:3),混匀;
4、4000转离心5min,取上层150ul测定。
四、酶标仪检测鸡蛋中三聚氰胺的测定过程:
1. 将所有试剂和样品放回室温20-28℃,但时间不要超过24小时;
2. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔条,固定在微孔板架上,将未使用的微孔条与干燥剂一起放入密封袋中存放;
3.用吸管将150ul标准品和样品吸入相应的微孔。确保每一种溶液都是用干净的吸管来绘制的,以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶标记物;
4. 轻轻摇动盘子60秒,20-28摄氏度孵育30分钟;
5. 将微孔中的溶液倒入水槽中,将清洗液填满微孔,摇匀丢弃,重复三次,共四次清洗盘子;
6. 清洗一次后,将溶液倒进孔中,然后翻转微孔板,在吸水纸上轻拍干燥;
7. 每个微孔加入100ul底物溶液;
8. 20-28℃孵育30分钟;
9. 每个微孔加入100ul停止液;
10. 用莱恩德酶标仪在450nm下读板。