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怎样鉴定酶标仪的性能?

时间:2021-11-18 14:09:11 点击次数:109
 

    近年来,酶标仪在临床实验室的应用越来越普及,使得酶免疫分析(EIA)的自动化和准确性越来越高。特别是近年来,进口和国产单通道和多通道自动酶标仪的种类和型号发展迅速,其中临床实验室自动化程度,继生化分析仪、血细胞计数器之后,凝血仪又得到了更新和改进。然而,目前国内外对酶标仪性能的系统评价方法较少。一些评价指标简单、不完整,对其进行绩效评价的方法不一致,导致不同仪器、不同厂家、不同用户、不同用户之间评价指标缺乏可比性。这是由于酶标仪在制造过程(多道检测器)和测定原理(垂直光路测光)以及其他水平光路测光仪(721分光光度计)的应用。因此,经过对国内外不同厂家、不同型号的几种仪器进行系统的研究和论证,初步建立了一套较为完善的酶标仪性能评价指标和基本鉴定方法。经初步应用,效果满意。根据读者和用户的要求,比较酶标仪器性能评价和鉴定方法的理论和原理。一、引言和补充,为同行在评价、鉴定和使用仪器时提供参考。从而为进一步提高试验结果的室内重复性和室内可比性提供可靠保证。

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    方法:


    一、滤光片波长精度检查及其峰值测定


    方法及其衡量的标准:用高精度紫外可见分光光度计(波长精度±0.3nm)对不同波长的滤光片进行光谱扫描,检测值与标定值之差即为滤光片波长精度,其差值越接近于零且峰值越大表示滤光片的质量越好,波长精度越高。


    二、灵敏度和准确度的监测


    方法:①灵敏度:精确配制6ug/ml重铬酸钾(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重铬酸钾溶液于小孔杯中,以0.05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(参比波长650nm)测定,其吸光度应≥0.01A。②准确度:准确配制:1mmo/L对硝基苯酚(提纯品)水溶液,然后以10mmo1/L氢氧化钠溶液25倍稀释之,加入200ul稀释液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(参比波长650nm)检测,其吸光度应在0.4A(0.395~0.408A)左右。


    三、通道差与孔间差检测


    方法及其表达方式:①通道差检测:取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑、透明、无划痕、无污染)以酶标板架作载体,分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液200u*后置于8个通道的相应位置,蒸馏水调零,采用双波长(测定波长490nm,参比波长630或650nm,以下均相同)连续测三次,观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。②孔间差的测量:选择同一厂家、同一批号酶标板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调0.065~0.070A)先后置于同一通道,蒸馏水调零,采用双波长检测,其误差大小用±1.96s衡量。


    四、零点飘移


    方法:取八只小孔杯,分别置于八个通道的相应位置,均加入200ul蒸馏水并调零,采用双波长或单波长(490nm)每隔30min测定一次,观察8个通道4h内的吸光度变化。其与零点的差值即为零点飘移。


    五、精密度评价


    方法及评价指标:每个通道三只小杯,分别加入200ul高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液,蒸馏水调零,采用双波长作双份平行测定,每日测定两次,连续测定20天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及相应的CV值。


    六、线性测定


    方法:精确称取甲基橙配制5个系列浓度的溶液,采用双波长平行检测8次求其均值。计算回归方程、相关系数r及标准估计误差Sy,x,并用±1.96Sy,x表示样品的95%测量范围。


    七、双波长评价


    方法:在运用酶标仪检测样品时,由于溶液中的小气泡、杯底的水纹印及划痕、小孔杯之间透明度的差异等等,这些都是仪器测定过程中常见的干扰因素,而标本中的干扰组份(如溶血、黄道)因洗涤而对测定结果影响则较小,因此我们将文献中的双被长评价方法改为:取同一厂、同一批号酶标板条(每个通道2条共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度调0.065~0.070A)先后于8个通道分别采用单波长(490nm)和双波长(测定波长490nm、参比波长630/650nm)进行检测,计算单波长和双波长测定结果的均值、离散度,比较各组之间是否具有统计学差异以考察双波长清除干扰因素的效果。


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