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酶标仪检测钙离子的方法介绍

时间:2021-06-21 09:54 点击次数:
         酶标仪主要通过两种方式检测钙离子通路:
     1,荧光方法。
       化合物与细胞膜上的离子通道结合后,离子通道的状态发生改变,通道被打开,钙离子进入细胞。进入细胞后,与细胞内的钙离子荧光指示剂结合,发出荧光并被酶标仪捕获。荧光强度与进入细胞的钙离子含量成正比。荧光指示剂大多是FLuo3。Fluo3-AM是乙酰甲酯的衍生物,可以穿透细胞膜进入细胞。进入细胞后,被细胞内酯酶切成氟,留在细胞内。钙离子进入细胞后与它结合,它发出强烈的荧光。
     2、发光的方法。
        A水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有钙离子(Ca2+)与复合物结合时,coelenterazine才能被氧化产生高能产物Coelenteramide,同时释放CO2和蓝色荧光(-466 nm)。正是这种Ca2+依赖的反应过程(见图1)使得coelenterazine非常适合监测活细胞中的钙离子水平。
      与传统的荧光钙离子指示剂相比,它具有以下优点:
      1)、可检测范围广泛的钙离子浓度-从0.1 μM到>100 μM;
      2)、样品无自身荧光,且背景荧光低于使用的钙离子荧光指示剂;虽然信号比荧光钙离子指示剂弱,但通过成像仪器可以获得较高的信噪比,因此具有较高的灵敏度。
      3)、丙泊林复合物可以稳定地维持在细胞内,使其能够监测钙离子数小时至数天。

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