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酶标分析仪检测食物中黄曲霉毒素B1的方法与步骤

时间:2021-06-07 05:40:55 点击次数:56
          黄曲霉毒素B1属于自然界强烈的致癌物质之一。 它一般产生于玉米,花生,巴西坚果和棉花种子中。 鉴于这种霉菌毒素的毒性,欧洲 做出了相近的限量,对黄曲霉毒素B1的限量为2ppb,对黄曲霉毒素总量的限量为4ppb。

  使用酶标仪能够快速而准确的检测谷物,饲料和其他食品中的黄曲霉毒素B1。

  检测原理

  黄曲霉毒素B1检测试剂盒应用直接竞争酶联免疫吸附原理。

  (1)样品提取液或黄曲霉B1标准品100ul与酶联偶合物200ul,混合后取100ul,

  (2)加入到抗体包被的微孔中等待15分钟,

  (3)洗板去除未参加抗原-抗体反应的黄曲霉毒素B1,

  (4)酶的底物100ul加入到微孔中,等待5分钟,颜色变为蓝色,颜色的深浅与黄曲霉毒素B1的含量成反比,

  (5)加入终止液100ul,颜色变为黄色,

  检测步骤

  1.取固体或液体样品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混匀3分钟,静止10分钟,过滤,收集滤液,吸取100ul滤液加100ul分析缓冲液,混匀。

  2.取出绿色的稀释孔和无色的有抗体包被的稀释孔各放入一个板架上。

  3.吸取200ul酶联偶合物加入到绿色的稀释孔,再吸取100ul标样(0、2、5、20、50ppb),和100ul步骤1的待检混合样,混匀3次。

  4.然后从300ul混合物中吸取100ul加入到无色的有抗体包被的稀释孔中,静止15分钟。

  5.将孔中的液体倒掉,用蒸馏水冲洗每个孔,将微孔倒置于纸巾上把水吸干。

  6. 加入100ul底物,放置5分钟,颜色变为蓝色。

  7. 加入100ul终止液,颜色变为黄色。

  8. 上机检测,(酶标仪滤镜450nm,示差滤镜630nm)

  9. 稀释倍数f:1

  10. 定量限:生奶0.002ug/kg,

  11. 牛奶或花生酱≤20ug/kg,合格,

  12. 计算公式:X= c*f

  备注:

  1. 酶联偶合物25ml :sensitive conjugate 底物15ml :substrate 终止液15ml :stop solution 分析缓冲液 15ml :assay buffer

  2. 试剂盒在使用前恢复到室温(18~30度),使用完毕后,放入2~8度冰箱冷藏

  3. 标样中含有毒素,致癌性,使用时戴好橡胶手套、安全眼镜、工作服等防护装备

  4. 在读数前,微孔中应没有气泡,否则影响分析结果

  5. 标准曲线的相关系数 r ≥0.9850

  6. 严格遵守规定的操作时间,否则导致数据不

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