【一、食品安全行业实验检测背景与需求】
伴随着国家针对食品安全监管力度持续不断地强化开展, 在食品安全相关要素的检测范畴之内, 已然从以往传统意义上的定性筛查, 朝向准确化的定量分析方向, 进行了多维度的全面升级。依据《食品安全国家标准 食品中兽药残留限度》（GB 31650 - 2019）以及《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限度》（GB 2761 - 2017）等一系列具有强制性特征的标准相应要求, 在食品安全检测所涉及的食品中, 兽药残留、抗生素、真菌毒素等各类有害物质的检测项目，日益呈现出细化的态势, 并且检测限值持续不断地进行收严操作。行业实验室面临着核心挑战, 那就是, 要面对怎样处理保证数据准确性这件事，与此同时, 还要提升批量样品检测通量。这并不简单, 在此阶段内, 还务必要设法缩短检测周期。并且, 仪器设备长期稳定运行所带来的持续稳定状态也要维持住。同时, 要把维护成本通过有效的办法控制在合理范围之内的难度也不小。传统比色法, 其检测已存在困难, 半定量试纸条检测同样如此, 难以符合法规对于定量结果抱有的高要求。所以, 酶标仪成为了标准化检测工具, 它是基于酶免疫吸附法的。在兽药残留、真菌毒素、违禁添加物等具体项目的实验室检测实施过程里, 正一步一步慢慢变成主流配置。以光学性能稳定, 其特点为软件功能全面, 操作具备人性化等, 莱恩德酶标仪为行业用户提供了一套适应国标要求这样的系统化实验方案。
【二、实验所需仪器与试剂】
核心仪器：莱恩德LD-D96酶标仪
本方案推荐选用莱恩德LD - D96酶标仪当作核心检测设备, 该仪器有着8通道垂直光路设计，能够实现96孔板的高通量同步读数, 单次检测周期能够控制在数分钟以内, 显著提升实验室批处理能力。它的读数范围是从0到4.000Abs, 线性范围为0至3.000Abs, 与波长范围在400 - 1000nm的光学系统相配合, 能够兼容市面上绝大多数ELISA试剂盒的检测波长需求。仪器的示值误差处于小于等于加减零点零二Abs以内, 稳定性处于小于等于加减零点零零三Abs, 重复性的CV占比处于小于等于百分之零点三的范围, 正是这样组合而成的一系列精密度方面所属的参数, 切实保障了在同一批次内部以及从不同批次之间其针对检测数据所具备的可重复性, 从而得以满足实验室质量方向的控制需求以及数据溯源方向的要求。除此以外, LD-D96配备了大于或等于7寸的彩色液晶触摸屏, 有着全中文的操作界面, 支持可视化布板以及整板测量信息的显示, 内置专业的酶标仪软件, 可以存储大于或等于500组程序, 也可存储大于或等于10000个样本结果, 数据计算模式包含吸光度、线性方程、对数方程、二次方程、三次方程、样条函数、抑止率等内容, 全部覆盖了ELISA法所需要的曲线拟合与定量分析功能。仪器配备了DC12V 22W的进口卤素灯光源, 而且拥有电源管理功能, 它在让光源寿命得以延长的情况下, 还使长期运行的电耗成本降了下来。
配套试剂与耗材
本实验所需要的配套试剂以及耗材, 尽皆属于ELISA检测通用的品类范畴, 用户能够依据检测项目, 像是β -受体激动剂、四环素类、黄曲霉毒素B1等等这样的项目, 自行去采购与之对应的试剂盒。常规的耗材清单涵盖: 96孔酶标板, 这里建议选用高吸附型的；移液器以及配套的吸头, 既有单道的又有多道的；处于37℃±0.5℃环境的恒温培养箱；用来增加洗涤一致性的洗板机, 此为可选择配备而非必需；去离子水抑或是超纯水；样本稀释液以及洗涤缓冲液, 一般是由试剂盒予以提供的。选择试剂盒, 应优先去确认, 其检测波长是不是处在LD-D96酶标仪的滤光片可装载范围之内, 该仪器多能够装载15片滤光片, 用户能够依据日常检测项目, 灵活去配置对应波长的滤光片, 以此实现一机多用途。
【三、标准实验操作方法】
样品前处理
依照所买进试剂盒说明书给出的要求, 针对待测的食品样品展开均质操作, 开展提取操作, 进行净化操作以及实施浓缩操作。举例来说, 对于肉制品里面瘦肉精类残留的检测工作, 要把样品切碎之后使用乙酸乙酯或者甲醇 - 盐酸溶液来提取 , 经过离心分离之后获取上清液, 把pH值调节到中性, 接着借助固相萃取柱进行净化。前处理过程之中的每一个步骤都应当严格把控时间以及温度, 防止目标物降解或者产生交叉污染。
仪器准备与设置
启动莱恩德 LD-D96 酶标仪, 等仪器自己检查完毕且稳定 10 分钟之后再开展测试。于触摸屏上挑选对应项目的检测程序, 预先设定主波长和参比波长（像是 450nm / 630nm）, 设置振板参数: 振板速度选取中级（2 级）, 振板时间规定为 5 秒, 借此保证反应液在孔内混合均匀, 不过要防止过强振板致使液滴溅出。要是采用动力学模式测定酶促反应速率, 得同时设定读数间隔时间（例如每 30 秒读一回, 持续 10 分钟）。
实验操作步骤
每孔按50到100微升的量, 把标准品和处理后的样品依次加到酶标板相应孔位, 要留意更换移液器尖嘴以防交叉混杂, 加了酶标抗体或者酶结合物后, 盖上封板薄膜, 放置在37摄氏度的恒温培养箱里孵育30至60分钟，孵育完后, 用洗板机或者手动开展洗涤事宜, 洗涤次数通常是5次, 每次注入300微升洗涤液, 停留30秒钟后使之干噪, 接着加入显色底物溶液比如TMB，在黑暗中显色15分钟, 显色完毕后, 马上加入终止液如2M硫酸停止反应。先把酶标板放置到LD - D96仪器的载板架那儿, 要保证板体是平平整整的没有出现倾斜状况, 再去点击“开始读数”这个按钮, 如此一来仪器就会自动把全板的吸光度测量工作给完成, 并且还会将原始数据保存下来。
数据采集与处理
仪器完成读数之后, 能够在触摸屏之上即时查看各个孔的吸光度数值以及整板测量信息。借助内置软件选择“抑止率”或者“浓度”计算模式, 系统会依据标准品浓度自动拟合标准曲线（推荐采用四参数Logistic回归模型）, 并且反算出各个样品孔的目标物浓度。用户还能够将结果导出至U盘或者通过外接打印机直接打印检测报告, 报告内容涵盖样品编号、检测项目、实测浓度、判定结论以及标准曲线图谱。
【四、实验结论与方案优势】
本实验方案是以莱恩德LD-D96酶标仪当作核心, 跟通用ELISA检测试剂盒整合, 能够有效地做完食品内兽药残留、抗生素、真菌毒素等高风险指标的定量检测工作的。依照实验得出来的数据展现, 那一仪器只是针以及处于0到3.000Abs线性范限以内的时候才具备优良的线性相关性, 标准曲线相关系数R²大体上都能够达到0.995以上, 这是吻合国标对于准确完成定量检测的要求的。LD - D96酶标仪具备高重复性, 其CV≤0.3%, 存在低稳定性漂移, 这确保了同一样品多次检测结果具备一致性, 也具备可复现性, 格外适合用于实验室内部质量控制, 还适合用于扩项认证时的数据支撑。在操作层面, 该仪器靠着一键式检测流程跟中文可视化界面, 极大地降低了操作人员的培训门槛。单机就能完成曲线标定、数据存储和报告输出, 不用去额外配置电脑就能独立运行, 切实提升了实验室单日检测通量。站在行业用户的角度来看, 该方案在满足食品安全国标检测要求的情形下, 能够降低仪器采购和运维的综合成本。LD-D96采用模块化设计, 日常维护只需定期清洁滤光片以及更换卤素灯, 不存在复杂耗材更换需求。总体说来, 莱恩德LD-D96酶标仪予以食品安全检测行业, 一套准确的, 并且高效的, 还合规的智能化实验解决方案。
【五、参考文献/相关标准】
1. 国标31650, 2019年版的食品安全国家标准, 关于食品当中兽药残留限度。
2. 食品中真菌毒素限度方面的食品安全国家标准, 是GB 2761 - 2017。
3. GB/T 21311 至 2007 标准, 用于测定动物源性食品里硝基呋喃类药物代谢物残留量, 采用免疫亲和柱净化与高效液相色谱法。
4. 为测定动物源性食品中多种β -受体激动剂残留量, 所采用的办法是液相色谱 - 串联质谱法, 其依据的标准乃是GB/T 22286 - 2008。
5. 采用酶联免疫吸附法的通用技术规范, 此准则编号被定义为SN/T 1811 - 2006。
6. 莱恩德LD-D96酶标仪使用说明书及技术参数手册
鲁公网安备 37079402001539号