使用酶标分析仪检测酸奶中三聚氰胺的操作步骤

　

   使用酶标分析仪检测酸奶中三聚氰胺的操作步骤。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔，并用提取液摇匀测定。在30分钟的孵育过程中，样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争，与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后，微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后，在每孔中加入一种清晰的底物溶液，结合酶标仪将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应，根据各孔颜色深度读取数据。根据标准颜色，得到样品中三聚氰胺的浓度值。

一、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺需要准备的材料：

1、蒸馏水或去离子水

2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸头

3、4000转离心机

4、吸水纸或相当的吸水材料

5、450nm的酶标仪

6、计时器

7、20mM PBS：需自行配制

8、清洗液：需自行配制

二、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺试剂配制：

1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml

2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20

三、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺样品的前处理：    酸奶（稀释倍数：25）

1、取2ml酸奶；

2、加入8ml的20Mmpbs，混匀，测定PH值（ph=5.6左右）；

3、加入180ul 0.1MNaOH,将ph值调整到7左右；

4、取200ul加入到0.8ml的10%甲醇/20mMPBS中，混匀，取150ul测定；

四、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺测定过程：

1、将所有试剂及样品回升至室温20-28℃，但不要放置超过24小时；

2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条固定在微孔板架上，未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存；

3、吸取150ul标准品、样品到对应微孔中，必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取，避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶标记物到每个小孔中；

4、轻轻摇板60秒，20-28摄氏度下孵育30分钟；

5、将微孔中的溶液倒入水槽中，用清洗液完全充满微孔，震荡后倒掉，重复三次，总共四次洗板；

6、等一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干；

7、每个微孔中加入100ul底物溶液；

8、20-28摄氏度下，孵育30分钟；

9、每个微孔中加入100ul停止液；

10、使用莱恩德酶标仪450nm下读板