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使用酶标分析仪检测酸奶中三聚氰胺的操作步骤

时间:2021-05-21 13:53 点击次数:
 

   使用酶标分析仪检测酸奶中三聚氰胺的操作步骤。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔,并用提取液摇匀测定。在30分钟的孵育过程中,样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争,与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后,微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后,在每孔中加入一种清晰的底物溶液,结合酶标仪将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应,根据各孔颜色深度读取数据。根据标准颜色,得到样品中三聚氰胺的浓度值。

一、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺需要准备的材料:

1、蒸馏水或去离子水

2、可吸取50ul100ul的移液器及吸头

34000转离心机

4、吸水纸或相当的吸水材料

5450nm的酶标仪

6、计时器

720mM PBS:需自行配制

8、清洗液:需自行配制

二、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺试剂配制:

120mM PBS 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml

2、清 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20

三、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺样品的前处理:    酸奶(稀释倍数:25

1、取2ml酸奶;

2、加入8ml20Mmpbs,混匀,测定PH值(ph=5.6左右);

3、加入180ul 0.1MNaOH,ph值调整到7左右;

4、取200ul加入到0.8ml10%甲醇/20mMPBS中,混匀,取150ul测定;

四、酶标仪检测酸奶中三聚氰胺测定过程:

1、将所有试剂及样品回升至室温20-28℃,但不要放置超过24小时;

2、从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条固定在微孔板架上,未使用的孔条与干燥剂一同放入密封袋中保存;

3、吸取150ul标准品、样品到对应微孔中,必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取,避免交叉污染。加入50ul三聚氰胺酶标记物到每个小孔中;

4、轻轻摇板60秒,20-28摄氏度下孵育30分钟;

5、将微孔中的溶液倒入水槽中,用清洗液完全充满微孔,震荡后倒掉,重复三次,总共四次洗板;

6、等一次清洗完后,倒掉孔中溶液,然后翻转微孔板在吸水纸上拍干;

7、每个微孔中加入100ul底物溶液;

820-28摄氏度下,孵育30分钟;

9、每个微孔中加入100ul停止液;

10、使用莱恩德酶标仪450nm下读板

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