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酶标分析仪的免疫吸附试验原理步骤

时间:2021-06-15 09:05 点击次数:
      酶标仪是一种应用非常广泛的医疗设备。酶标分析仪免疫吸附试验的基本原理如下:
1、先将多余的特异性抗体(或抗原)涂在载体(酶标板)上,通过抗原-抗体反应使副物质(抗原或抗体)和酶标(用hrp -辣根过氧化物)。酶标抗体或抗原)也与载体结合(固相分离)。洗去游离酶标签后,添加底物。与载体结合的标记酶促进了底物的颜色。最后,利用光电比色法对测试对象进行定性判断或定量测定。上述方法的灵敏度可达ng/ml水平。
2、包覆ELISA板:在ELISA板孔中加入特异性抗原溶液,4℃过夜。然后洗3到5次,清洗解决方案(档板洗板),这样的特异抗原的解决方案是牢牢地吸附在表面的microwell微量滴定板,形成固相抗原和残余液体杂质冲走。
3、加入被包被抗原溶液(患者血清):如果被包被抗原溶液中含有被测抗体,经孵育反应后,会与被包被抗原特异性结合,形成被包被抗原与被测抗体的复合物。它被吸附在微量滴定板的微孔表面。然后再次清洗,以清除残留的液体和干扰物质。
4、添加酶偶联物:孵育反应后,形成包被抗原+试验抗体+酶标记抗原的三组分复合物,也吸附在微孔表面,再进行洗涤,去除游离或非特异性酶偶联物(洗盘)污渍。
5、加显色液:显色反应10分钟至20分钟后,被吸附络合物中的酶与显色底物溶液形成显色液。此时,由于游离或非特异性吸附的酶已被去除,溶液的颜色仅取决于已与被分析物结合的酶的数量,所以它能真实反映被分析物的浓度。酶凝固的越多,颜色就越深,这意味着被分析物的浓度就越大。
6、加停止液:停止显色反应。
酶标仪检测:将显色的酶标板放在酶标仪上进行光电比色检测。该仪器检测空白孔、阴性和阳性对照孔、标准孔、质控孔和患者样品孔的吸光度。值,并根据程序要求自动计算患者样本中分析物的浓度或进行定性分析。

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