【一、生命科学与生物检测行业实验背景与需求】
由于生命科学、生物制药、食品安全以及临床诊断等领域, 对于高精度、多波长检测的需求, 持续不断地增长, 所以传统的固定波长酶标仪, 己经难以满足复杂实验里, 对全光谱扫描而且多项目联检的应用要求了。在近些年当中, 《中国药典》以及相关的行业标准, 针对药物研发、蛋白质定量、细胞活性检测等这些实验, 提出了更为严格的波长精度以及数据重复性指标。当下实验室普遍面临着这样的挑战, 那就是, 怎样在一次检测里面, 迅速获取处于330-1000nm这个宽波段范围之内的吸光度数据, 并且确保结果稳定且可靠。它是全波长酶标分析仪, 具备无需更换滤光片的特点, 还能够进行连续光谱扫描, 正因如此, 它正逐渐成为科研单位的标准配置, 同时也正逐渐成为质检单位的标准配置。
【二、实验所需仪器与试剂】
核心仪器：莱恩德LD-QM10全波长酶标分析仪
本方案的核心仪器是莱恩德 LD-QM10 型全波长酶标分析仪, 它搭载着原装进口的光栅, 其波长范围覆盖在 330 到 1000nm 之间, 能够对酶标板微孔展开全光谱扫描, 从而有效摆脱固定滤光片的限制, 它的核心技术优势在于光学系统采用全封闭设计, 光路稳定可靠并且长期不需要维护。要是说到关键性能, 仪器的读数范围能达到0.000 - 5.000Abs , 线性范围则是0.000 - 3.000Abs , 重复性CV小于等于0.2% , 就连吸光度示值误差也小于等于±0.01Abs , 这全部能够满足针对蛋白质定量（280nm）、核酸浓度（260nm）以及ELISA终点法或者动力学等实验的准确测量要求。仪器配备了8吋那种液晶触摸屏, 还有专业的端的分析软件嗷, 它支持那么多种测量模式, 像终点法, 动力学, 抑止率加上光谱扫描等等这些模式, 而且还具有温控功能, 这个功能的温度范围是室温加上4℃一直到50℃, 这种温控功能能够确保在像细胞活性等的一些实验里面, 反应体系的温度可以处于恒定状态。
配套试剂与耗材
实施本方案所涉实验相关之常规试剂跟各类耗材, 得依据具体的检测项目来进行配置, 其通用清单内容如下:
有一款96孔酶标板, 其材质为高结合力聚苯乙烯或者普通聚苯乙烯, 其中推荐使用透明板来进行比色法操作, 而黑色或者白色板则用于荧光法操作。
对检测缓冲液而言, 存在像PBS（其pH值为7.4）这样的, 还有用来进行碳酸盐包被的缓冲液, 另外还有封闭液, 封闭液包含BSA或脱脂奶粉三类情况。
用于ELISA检测的显色/终止液, 其中包括TMB底物液, 还有2M硫酸终止液。
用于洗涤的液体, 是含有百分之零点零五吐温二十的磷酸缓冲盐溶液。
先有标准品, 那是经过梯度稀释的标准蛋白, 还有待测样本, 此样本为待检血清或者细胞裂解液, 通过这样的方式来进行相关检测。
【三、标准实验操作方法】
样品前处理
依据检测目标来展开处理 , 比如说 , 在开展蛋白定量 （采用BCA法）之际 , 要把标准品跟待测样本按照梯度稀释之后再添加到酶标板当中 ；在进行ELISA检测之时 , 需要完成抗原包被 、封闭 , 还有一抗孵育 、二抗孵育以及显色等一系列步骤。所有的样本都要防止出现气泡 , 并且要保证每孔的加样量达成一致 （一般是100μL/孔）。
仪器准备与设置
1. 把LD-QM10全波长酶标分析仪开启, 接着让其进行预热, 等待它自检通过。建议把预热时间设定在15分钟以上, 以此来保障光源, 也就是进口卤素灯, 处于稳定状态。
2. 于触摸屏或者配套软件里挑选检测模式, 要是开展终点法ELISA, 那就选取“终点法”, 要是监测酶促反应进程, 那就选择“动力学”。
3. 做出检测波长的设置: 针对于ELISA显色这种情况而言, 一般会去设定450nm（此为TMB底物）将其当做一个波长, 或者把630nm设定成参比波长；要是针对蛋白定量, 那就需要设置562nm（此乃BCA法）或者280nm（此为紫外吸收法）。凭借仪器所具备的全波长特性, 能够通过一键操作来进行双波长或者多波长的检测设置, 从而达到消除背景干扰的目的。
4. 打开振板功能, 设定振板强度为处于中间程度的“中”这一级别。将时间设置至五秒到十秒这个范围, 要确保反应液能够均匀混合。
实验操作步骤
1. 把酶标板进行放置: 先将仪器盖板给打开, 接着把已经反应完毕的酶标板稳稳当当放入到载板架当中, 要保证板位处于端正状态并且不存在偏移情况。还要留意去擦拭板底使其没有手印或者水渍。
2. 进行启动检测, 于软件界面之中, 点击这个“开始读数”按钮。随后, 仪器的光栅便会自动展开扫描, 直至达到设定的波长位置, 并且在垂直光路那里, 8个通道会共同并且同时去读取数据, 以这样的方式, 能够快速地去完成针对96孔的检测工作。
3. 进行数据采集时, 当读数完成以后, 数据会自动传输到软件之中。要观察吸光度的值是不是处于0.001 - 4.000Abs这个有效的读数范围以内, 要是超出了该范围, 那么可以对样本进行稀释, 然后重新进行测量标点符号。
4. 数据处理: 借助软件内部所具备的线性方程、四参数拟合、样条函数等这类计算模型, 自动将标准曲线绘制出来并对样本浓度进行计算。该软件能够将≥500组程序以及≥10000个样本数据进行存储。
数据采集与处理
当检测得以完成之后, 要去查验标准曲线R²的值是不是大于或等于0.990。要是曲线拟合的状况不太好, 那就需要去查找加样所产生的误差或者排查反应的时间。借助软件能够直接导出Excel或者PDF报告, 这里面涵盖着原始吸光度、判定的结果以及质控数据。所有的数据都能够存入数据库, 从而支持对于历史的查询以及对比分析。
【四、实验结论与方案优势】
本实验方案是依据莱恩德LD-QM10全波长酶标分析仪来予以构建的, 借此能够以高成效去达成多波长比色分析, 还能够完成光谱扫描, 并且能够进行动力学检测。从对实验验证得出的结果来看, 该方案在进行蛋白定量时, 表现出优良的数据稳定性, 其重复性CV≤0.2%, 稳定性≤±0.002Abs, 且具有宽线性范围0-3.000Abs, 在核酸纯度评估里, 同样呈现优良的数据稳定性, 重复性CV≤0.2%, 稳定性≤±0.002Abs, 具备宽线性范围0-3.000Abs, 在ELISA检测当中, 还是展示出优良的数据稳定性, 重复性CV≤0.2%, 稳定性≤±0.002Abs, 拥有宽线性范围0-3.000Abs, 它能够全部替代传统固定波长仪器。一、其核心优势体现为, 进口光栅加上全封闭光路设计, 这免去了滤光片更换成本, 并且长期无需维护, 大幅降低了运维费用。二、其核心优势还体现在, 光谱扫描功能让实验室不必为不同检测项目购置多台设备, 一台设备就能覆盖330至1000nm波段。三、宽电压设计与U盘直连导出功能也是其核心优势, 极大地提升了环境适应性与数据流转效率。针对那些追寻高精度、高灵活性, 并且要符合国家药典以及行业标准要求的科研单位与质检单位而言, 此方案乃是能够提高实验效率、削减运营成本、确保数据合规性的理想之选。
【五、参考文献/相关标准】
1. 《中华人民共和国药典》, 在2020年版本之中的四部通则0401, 是关于紫外 - 可见分光光度法的相关内容。
2. 2011年的GB/T 26124标准所涉及的, 用于临床化学方面的体外诊断试剂盒。
3. 有关食品安全国家标准的食品微生物学检验,是GB 4789系列。
4. 莱恩德 LD - QM10 型, 全波长酶标分析仪的使用说明书, 以及技术手册。
鲁公网安备 37079402001539号