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酶标测定仪检测生鲜乳中三聚氰胺残留的步骤
时间:2021-05-19 10:08
   酶联吸附法测定生鲜乳中三聚氰胺残留量的方法。用提取液将样品中三聚氰胺均质振荡提取。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔开始反应。在30分钟的孵育过程中,样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争,与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后,微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后,在每孔中加入一种清晰的底物溶液,结合酶标仪将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应,根据各孔颜色深度读取数据。根据标准颜色,得到样品中三聚氰胺的浓度值。

一、酶标仪检测原料奶中三聚氰胺需要准备的材料:

1. 蒸馏水或去离子水

2. 可以吸收50ul和100ul的移液器和吸头

3.4000转离心

4. 吸水性纸或同等的吸水性材料

5. 450海里标

6. 计时器

7. 20mM PBS:自备

8. 清洗液:需自备

二、酶标仪检测原料奶中三聚氰胺试剂的制备:

1. 20mM PBS: 0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水使体积至1000ml

2. 洗涤溶液:0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水到定容1000ml。+0.5ml土壤温度20

三、酶标仪检测原料奶中三聚氰胺样品的预处理:原料奶(稀释比:1)

1. 取鲜奶10ml,冷冻离心10分钟(或放入冰箱10分钟,离心10分钟);

2. 除去上层乳脂,待样品恢复室温后,取下层150ul直接测量;

四、酶标检测仪测定生奶中三聚氰胺的方法:

1. 将所有试剂和样品放回室温20-28℃,但时间不要超过24小时;

2. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔条,固定在微孔板架上,将未使用的微孔条与干燥剂一起放入密封袋中存放;

3.用吸管将150ul标准品和样品吸入相应的微孔。确保每一种溶液都是用干净的吸管来绘制的,以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶标记物;

4. 轻轻摇动盘子60秒,20-28摄氏度孵育30分钟;

5. 将微孔中的溶液倒入水槽中,将清洗液填满微孔,摇匀弃去,重复三次,共洗盘四次;

6. 清洗一次后,将溶液倒进孔中,然后翻转微孔板,在吸水纸上轻拍干燥;

7. 每个微孔加入100ul底物溶液;

8. 20-28℃孵育30分钟;

9. 每个微孔加入100ul停止液;

10. 用莱恩德酶测定标仪在450nm下读板

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