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使用酶标分析仪检测婴儿奶粉中三聚氰胺的案例

时间:2021-06-23 02:06:37 点击次数:189
        酶标分析仪检测三聚氰胺残留量的方法。用提取液将样品中三聚氰胺均质振荡提取。首先将三聚氰胺酶标记物、样品提取液和标准品加入涂有三聚氰胺抗体的微孔开始反应。在30分钟的孵育过程中,样品提取液中的三聚氰胺与三聚氰胺酶标记物竞争,与微孔中的三聚氰胺抗体结合。孵育30分钟后,微孔中所有未结合的三聚氰胺和三聚氰胺酶标记物都被冲洗掉。用去离子水洗涤后,在每孔中加入一种清晰的底物溶液,结合酶标分析仪标记将无色底物转化为蓝色物质。孵育30分钟后停止反应,根据各孔颜色深度读取数据。根据标准颜色,得到样品中三聚氰胺的浓度值。

  一、酶标仪检测婴儿奶粉中三聚氰胺所需准备的材料:

      1、蒸馏水或去离子水

      2、可吸取50ul100ul的移液器及吸头

      34000转离心机

      4、吸水纸或相当的吸水材料

      5450nm的酶标仪

      6、计时器

       720mM PBS:需自行配制

      8、清洗液:需自行配制

二、酶标仪检测婴儿配方奶粉中三聚氰胺试剂配制:

     120mM PBS 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml

     2、清 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸馏水定容至1000ml.+0.5ml 土温20

      3、样品萃取液:称85g氯化钠定容到1L,摇匀,取出25ml加入25ml蒸馏水,再加入50ml 100% 甲醇,摇匀

      4、样品稀释液:0.31g磷酸二氢钠加上2.87g的磷酸氢二钠定容到1L,加入100ul吐温20,摇匀

三、酶标仪检测婴儿配方奶粉中三聚氰胺样品的前处理:  
       婴儿配方奶粉(稀释倍数:15

     1、称2g奶粉,加入6ml样品萃取液,混匀;

     24000转离心5min

     3、取0.2ml上清液加入到0.8ml样品稀释液中稀释5倍;

 

     4、取150ul测定;

四、酶标仪测定婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的步骤:
 
    1. 将所有试剂和样品放回室温20-28℃,但时间不要超过24小时;
 
    2. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔条,固定在微孔板架上,将未使用的微孔条与干燥剂一起放入密封袋中存放;
 
    3.用吸管将150ul标准品和样品吸入相应的微孔。确保每一种溶液都是用干净的吸管来绘制的,以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶标记物;
 
    4. 轻轻摇动盘子60秒,20-28摄氏度孵育30分钟;
 
    5. 将微孔中的溶液倒入水槽中,将清洗液填满微孔,摇匀丢弃,重复三次,共四次清洗盘子;
 
    6. 清洗一次后,将溶液倒进孔中,然后翻转微孔板,在吸水纸上轻拍干燥;
 
    7. 每个微孔加入100ul底物溶液;
 
    8. 20-28℃孵育30分钟;
 
   9. 每个微孔加入100ul停止液;

 

   10. 用酶标仪在450nm下读板

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